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流式细胞仪(FCM)现在可以正式用于饮用水中微

2019-04-16

100多年来,用于评估饮用水微生物安全性的方法基本保持不变:允许水中存在的细菌在固体营养培养基上生长(在温暖的温度下培养),然后计数形成的菌落&。肠道细菌大肠杆菌和肠球菌作为粪便污染的指标河北11选5官网投注&。同时,异养平板计数(HPC)被确定为一般微生物质量的量度&。该方法量化所有存在的微生物,其可以在约20-45℃的温度下繁殖(嗜温)&。根据全球标准,形成的菌落数量不应超过每毫升300个&。

细胞计数被严重低估

基于培养的方法有两个主要缺点:耗时 - 结果仅在HPC的情况下在3-10天后可用 - 并且样品中实际存在的活细胞中只有一小部分被计算在河北11选5投注平台内&。这是因为该方法仅检测那些在特定条件下能够生长并形成菌落的细菌 - 通常为总量的0.01-1%&。因此,瑞士食品卫生条例(HyV)中规定的每毫升300个菌落形成单位(CFU / mL)的限制是基于对实际存在的微生物数量的显着低估&。然而,大肠杆菌和肠球菌的培养通常产生可靠的结果&。(不同类型水的总细胞计数如图1所示)

细胞总数和指纹

2012年12月,FOPH合并方法编号为&。333“使用流式细胞仪测定淡水中高和低核酸含量细胞的总细胞数和比例”作为推荐的测试方法进入Swiss Food Compendium&。现在,FCM(参见专栏文献)可用于确定水样中的细胞总数,而不是HPC(不再被认为与食品卫生相关)&。与AMC不同,此计数提供河北11选5官网投注了水的微生物含量的实际指示,并且 - 至少间接地 - 可以得出关于污染的结论&。另外,使用相同的方法,还可以确定较大和较小细胞的比例(即具有高或低核酸含量的细胞)&。这被专家视为饮用水的“指纹”:

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新标准方法

瑞士是世界上第一个采用这种先进方法定量水中微生物细胞的国家&。Eawag饮用水专家Stefan Koetzsch认为其他国家,河北11选5投注平台如荷兰,将很快跟进&。鉴于总细胞计数要高得多,联邦当局是否应该指定新的限制?“不,”Koetzsch说,“这不合适;也不可能,因为水的微生物成分将取决于其特定的起源,而高细胞计数本身并不能提供可能病原体的确凿证据”(见图&。1)&。然而,Koetzsch及其同事确信FCM将成为饮用水监测的新标准&。该方法非常适用于监控整个供应系统(从饮用水抽取到处理和分配到消费者),优化流程和识别问题&。正在努力开发该方法的自动化版本,其允许“在线”监测细菌细胞计数&。

方框:流式细胞仪如何工作?

流式细胞术开发用于医学领域中的应用,其自20世纪80年代以来一直被使用,例如用于计数(相对大的)血细胞&。当该方法用于饮用水分析时,样品中包含的(通常很河北11选5投注平台小的)细胞首先用荧光染料染色,荧光染料与DNA结合&。然后将细胞以单一文件通过玻璃毛细管,在那里它们暴露于来自激光器的光束&。通过检测器拾取所得的散射和荧光信号,并使用分析软件对每个单独的颗粒(细胞)进行分类&。

在将流式细胞术方法应用于日常实践中的水分析之前,必须进行严格的测试&。技术与创新委员会(CTI)和瑞士天然气与水工业协会(SVGW)为此标准化和验证提供了财政支持&。来自学术界,行政管理部门和公共/私人实验室的共24个合作伙伴参与了这一过程&。